Osteoartriit (OA) on üks pikaajalisi kroonilisi degeneratiivseid luude liigeste haigusi, mis mõjutab üle 65-aastast elanikkonda.
1]. Üldiselt diagnoositakse OA patsientidel kahjustatud kõhre, põletikuline sünoovium ja erodeerunud kondrotsüüdid, mis põhjustavad valu ja füüsilist stressi [
2]. Artriitiline valu on peamiselt põhjustatud liigesekõhre degeneratsioonist põletikust ja kui kõhr on tõsiselt kahjustatud, võivad luud üksteisega kokku põrkuda, põhjustades talumatut valu ja füüsilisi raskusi.
3]. Põletikumediaatorite kaasamine selliste sümptomitega nagu valu, turse ja liigese jäikus on hästi dokumenteeritud. OA patsientidel leidub sünoviaalvedelikus põletikulisi tsütokiine, mis põhjustavad kõhre ja subkondraalse luu erosiooni.
4]. Kaks peamist kaebust, mida OA patsientidel tavaliselt on, on valu ja sünoviaalpõletik. Seetõttu on praeguste OA-teraapiate esmased eesmärgid valu ja põletiku vähendamine. [
5]. Kuigi olemasolevad OA ravimeetodid, sealhulgas mittesteroidsed ja steroidsed ravimid, on tõestanud oma efektiivsust valu ja põletiku leevendamisel, on nende ravimite pikaajalisel kasutamisel tõsised tagajärjed tervisele, nagu südame-veresoonkonna, seedetrakti ja neerufunktsiooni häired.
6]. Seega tuleb osteoartriidi raviks välja töötada tõhusam ravim, millel on vähem kõrvaltoimeid.
Looduslikud tervisetooted muutuvad üha populaarsemaks, kuna need on ohutud ja hõlpsasti kättesaadavad [
7]. Traditsioonilised Korea ravimid on tõestanud oma efektiivsust mitmete põletikuliste haiguste, sealhulgas artriidi vastu.
8]. Aucklandia lappa DC. on tuntud oma raviomaduste poolest, nagu qi vereringe parandamine valu leevendamiseks ja mao rahustamiseks, ning seda on traditsiooniliselt kasutatud loodusliku valuvaigistina [
9]. Varasemad aruanded näitavad, et A. lappal on põletikuvastane [
10,
11], valuvaigisti [
12], vähivastane [
13] ja gastroprotektiivne [
14] efektid. A. lappa mitmesugused bioloogilised aktiivsused on põhjustatud tema peamistest aktiivsetest ühenditest: kostunoliid, dehüdrokostuslaktoon, dihüdrokostunoliid, kostuslaktoon, α-costol, saussurea laktoon ja kostuslaktoon [
15]. Varasemad uuringud väidavad, et kostunoliid näitas põletikuvastaseid omadusi lipopolüsahhariidis (LPS), mis indutseeris makrofaage NF-kB ja kuumašoki valgu raja reguleerimise kaudu.
16,
17]. Siiski ei ole üheski uuringus uuritud A. lappa potentsiaalset toimet OA ravis. Käesolevas uuringus on uuritud A. lappa terapeutilist toimet OA vastu, kasutades (mononaatrium-jodoatsetaat) MIA ja äädikhappega indutseeritud näriliste mudeleid.
Mononaatrium-jodoatsetaati (MIA) kasutatakse laialdaselt loomade valuliku käitumise ja OA patofüsioloogiliste tunnuste tekitamiseks.
18,
19,
20]. Põlveliigestesse süstimisel häirib MIA kondrotsüütide metabolismi ning kutsub esile põletikku ja põletikusümptomeid, nagu kõhre ja subkondraalne luu erosioon, mis on OA peamised sümptomid.
18]. Äädikhappega indutseeritud väänlemisreaktsiooni peetakse laialdaselt loomade perifeerse valu simuleerimiseks, kus põletikulist valu saab kvantitatiivselt mõõta.
19]. Hiire makrofaagide rakuliini RAW264.7 kasutatakse laialdaselt põletikuvastaste rakuliste reaktsioonide uurimiseks. LPS-iga aktiveerimisel aktiveerivad RAW264 makrofaagid põletikuradu ja eritavad mitmeid põletikulisi vahendajaid, nagu TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS ja IL-6.
20]. Selles uuringus on hinnatud A. lappa antinotsitseptiivset ja põletikuvastast toimet OA vastu MIA loommudelil, äädikhappega indutseeritud loommudelil ja LPS-ga aktiveeritud RAW264.7 rakkudel.
2. Materjalid ja meetodid
2.1. Taimne materjal
A. lappa DC kuivatatud juur. katses kasutatud toode hangiti firmalt Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Soul, Korea). Selle tuvastas prof Donghun Lee, Gachoni ülikooli Korea meditsiini kolonel, ravimtaimede farmakoloogia osakond ja vautšeri näidise number deponeeriti 18060301.
2.2. A. lappa ekstrakti HPLC analüüs
A. lappa ekstraheeriti püstjahutiga (destilleeritud vesi, 3 tundi 100 °C juures). Ekstraheeritud lahus filtriti ja kondenseeriti madalsurveaurustiga. A. lappa ekstrakti saagis oli pärast külmkuivatamist temperatuuril –80 °C 44,69%. A. lappa kromatograafiline analüüs viidi läbi HPLC-ga, mis oli ühendatud 1260 InfinityⅡ HPLC-süsteemiga (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Kromaatiliseks eraldamiseks kasutati 35 °C juures EclipseXDB C18 kolonni (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent). Kokku 100 mg proovi lahjendati 10 ml 50% metanoolis ja töödeldi ultraheliga 10 minutit. Proovid filtreeriti 0,45 μm süstlafiltriga (Waters Corp., Milford, MA, USA). Liikuva faasi koostis oli 0,1% fosforhape (A) ja atsetonitriil (B) ning kolonn elueeriti järgmiselt: 0-60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% lahusti B voolukiirusega 1,0 ml/min. Heitvett vaadeldi lainepikkusel 210 nm, kasutades 10 μl süstimismahtu. Analüüs viidi läbi kolmes eksemplaris.
2.3. Loomade pidamine ja majandamine
Isased Sprague-Dawley (SD) rotid vanuses 5 nädalat ja isased ICR hiired vanuses 6 nädalat osteti ettevõttelt Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Loomi hoiti ruumis, kus kasutati konstantset temperatuuri (22 ± 2 °C) ja niiskust (55 ± 10%) ning valguse/pimeduse tsüklit 12/12 tundi. Loomi tutvustati seisundiga rohkem kui nädal enne katse algust. Loomadel oli ad libitum sööda- ja veevaru. Kõikides loomkatsetes järgiti rangelt Gachoni ülikoolis kehtivaid loomade hooldamise ja käitlemise eetilisi reegleid (GIACUC-R2019003). Uuring oli mõeldud uurijaga pimedaks ja paralleelseks uuringuks. Järgisime eutanaasia meetodit vastavalt loomkatsete eetikakomitee juhistele.
2.4. MIA süstimine ja ravi
Rotid jaotati juhuslikult 4 rühma, nimelt võlts-, kontroll-, indometatsiin ja A. lappa. Olles anesteseeritud 2% isofluoraani O2 seguga, süstiti rottidele 50 µl MIA-d (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intraartikulaarselt põlveliigestesse, et viia eksperimentaalne OA. Ravi viidi läbi järgmiselt: kontroll- ja võltsrühmi hoiti ainult AIN-93G põhitoiduga. Ainult indometatsiini rühmale lisati AIN-93G dieeti indometatsiin (3 mg/kg) ja A. lappa 300 mg/kg rühm määrati AIN-93G dieedile, millele oli lisatud A. lappa (300 mg/kg). Ravi jätkati 24 päeva jooksul alates OA esilekutsumise päevast kiirusega 15–17 g 190–210 g kehakaalu kohta päevas.
2.5. Kaalu kandevõime mõõtmine
Pärast OA esilekutsumist viidi läbi rottide tagajäsemete kandevõime mõõtmine töövõimetus-MeterTester600-ga (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) vastavalt plaanile. Arvutati kaalujaotus tagajäsemetel: kandevõime (%)
