Osteoartriit (OA) on üks pikaajalistest kroonilistest degeneratiivsetest luu- ja liigesehaigustest, mis mõjutab üle 65-aastaseid inimesi [1].
1Üldiselt diagnoositakse OA-ga patsientidel kahjustatud kõhr, põletikuline sünoviaalmembraan ja erodeerunud kondrotsüüdid, mis põhjustavad valu ja füüsilist ebamugavust [
2Artriidivalu on peamiselt põhjustatud liigeste kõhrede lagunemisest põletiku tagajärjel ja kui kõhr on tõsiselt kahjustatud, võivad luud üksteisega kokku põrgata, põhjustades talumatut valu ja füüsilist raskust [
3Põletikuliste mediaatorite kaasamine selliste sümptomitega nagu liigese valu, turse ja jäikus on hästi dokumenteeritud. OA-ga patsientidel leidub sünoviaalvedelikus põletikulisi tsütokiine, mis põhjustavad kõhre ja subhondraalse luu erosiooni [
4]. Kaks peamist kaebust, mis OA-patsientidel üldiselt esinevad, on valu ja sünoviaalkoe põletik. Seetõttu on praeguste OA-ravide peamised eesmärgid valu ja põletiku vähendamine.
5Kuigi olemasolevad OA ravimeetodid, sealhulgas mittesteroidsed ja steroidsed ravimid, on tõestanud oma efektiivsust valu ja põletiku leevendamisel, on nende ravimite pikaajalisel kasutamisel tõsised tervisemõjud, nagu südame-veresoonkonna, seedetrakti ja neerude talitlushäired [
6Seega tuleb osteoartriidi raviks välja töötada tõhusam ravim, millel on vähem kõrvaltoimeid.
Looduslikud tervisetooted on üha populaarsemad, kuna need on ohutud ja kergesti kättesaadavad [
7]. Traditsioonilised Korea ravimid on tõestanud oma efektiivsust mitmete põletikuliste haiguste, sealhulgas artriidi vastu [
8Aucklandia lappa DC. on tuntud oma raviomaduste poolest, näiteks parandab qi ringlust valu leevendamiseks ja mao rahustamiseks ning seda on traditsiooniliselt kasutatud loodusliku valuvaigistina [
9Varasemad aruanded näitavad, et A. lappal on põletikuvastane [
10,
11], valuvaigisti [
12], vähivastane [
13] ja gastroprotektiivne [
14] mõju. A. lappa mitmesugused bioloogilised aktiivsused tulenevad selle peamistest aktiivsetest ühenditest: kostunoliid, dehüdrokostunoliid, kostuslaktoon, α-kostool, saussurea laktoon ja kostuslaktoon [
15Varasemad uuringud väidavad, et kostunoliidil on lipopolüsahhariidis (LPS) põletikuvastased omadused, mis indutseerivad makrofaage NF-kB ja kuumašoki valgu raja reguleerimise kaudu [
16,
17Siiski pole ükski uuring uurinud A. lappa potentsiaalset aktiivsust OA ravis. Käesolev uuring on uurinud A. lappa terapeutilist toimet OA vastu, kasutades (mononaatriumjodoatsetaat) MIA ja äädikhappega indutseeritud näriliste mudeleid.
Mononaatriumjodoatsetaati (MIA) kasutatakse kuulsalt loomadel osteoartriidiga seotud valukäitumise ja patofüsioloogiliste tunnuste tekitamiseks [
18,
19,
20Põlveliigestesse süstimisel häirib MIA kondrotsüütide ainevahetust ja kutsub esile põletikku ning põletikulisi sümptomeid, nagu kõhre ja subhondraalse luu erosioon, mis on OA peamised sümptomid [
18Äädikhappega esilekutsutud väänlemisreaktsiooni peetakse laialdaselt loomadel esineva perifeerse valu simulatsiooniks, kus põletikulist valu saab kvantitatiivselt mõõta [
19Hiire makrofaagide rakuliini RAW264.7 kasutatakse laialdaselt põletikule reageerivate rakkude uurimiseks. LPS-iga aktiveerimisel aktiveerivad RAW264 makrofaagid põletikulisi radu ja sekreteerivad mitmeid põletikulisi vahendajaid, näiteks TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS ja IL-6 [
20Käesolevas uuringus hinnati A. lappa valuvastast ja põletikuvastast toimet OA vastu MIA loommudelis, äädikhappega indutseeritud loommudelis ja LPS-aktiveeritud RAW264.7 rakkudes.
2. Materjalid ja meetodid
2.1. Taimne materjal
Katses kasutatud A. lappa DC. kuivatatud juur hangiti ettevõttelt Epulip Pharmaceutical Co., Ltd. (Seoul, Korea). Selle identifitseeris Gachoni ülikooli Korea meditsiini osakonna taimse farmakoloogia osakonna professor Donghun Lee ning vautšeri näidise number oli 18060301.
2.2. A. lappa ekstrakti HPLC analüüs
A. lappa ekstraheeriti püstjahutiga (destilleeritud vesi, 3 tundi temperatuuril 100 °C). Ekstraheeritud lahus filtriti ja kondenseeriti madalrõhuaurustil. A. lappa ekstrakti saagis pärast külmkuivatamist temperatuuril –80 °C oli 44,69%. A. lappa kromatograafiline analüüs viidi läbi HPLC-ga, mis oli ühendatud 1260 InfinityⅡ HPLC-süsteemiga (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Kromaatiliseks eraldamiseks kasutati EclipseXDB C18 kolonni (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) temperatuuril 35 °C. Kokku 100 mg proovi lahjendati 10 ml 50% metanooliga ja sonikeeriti 10 minutit. Proovid filtreeriti 0,45 μm süstlafiltriga (Waters Corp., Milford, MA, USA). Liikuva faasi koostis oli 0,1% fosforhape (A) ja atsetonitriil (B) ning kolonni elueeriti järgmiselt: 0–60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% lahusti B voolukiirusega 1,0 ml/min. Väljavoolu jälgiti lainepikkusel 210 nm, kasutades süstimismahtu 10 μl. Analüüs viidi läbi kolmes korduses.
2.3. Loomade pidamine ja majandamine
Isased Sprague-Dawley (SD) rotid vanuses 5 nädalat ja isased ICR hiired vanuses 6 nädalat osteti firmalt Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea). Loomi hoiti ruumis, kus oli konstantne temperatuur (22 ± 2 °C) ja õhuniiskus (55 ± 10%) ning 12/12-tunnine valguse/pimeduse tsükkel. Loomi harjutati tingimustega enam kui nädal enne katse algust. Loomadele anti piiramatult sööta ja vett. Kõigis loomkatsete protseduurides järgiti rangelt Gachoni ülikooli kehtivaid loomade hooldamise ja käitlemise eetikareegleid (GIACUC-R2019003). Uuring kavandati uurija-pimeda ja paralleelkatsena. Järgisime eutanaasia meetodit vastavalt loomkatsete eetikakomitee suunistele.
2.4. MIA süstimine ja ravi
Rotid jagati juhuslikult nelja rühma: platseebo-, kontroll-, indometatsiini- ja A. lappa rotid. 2% isofluoraani O2 seguga anesteesia teel rottidele süstiti põlveliigestesse 50 μL MIA-d (40 mg/m2; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), et põhjustada eksperimentaalset OA-d. Ravi viidi läbi järgmiselt: kontroll- ja platseeborühmad said ainult AIN-93G baasdieeti. Ainult indometatsiinirühmale manustati indometatsiini (3 mg/kg), mis oli lisatud AIN-93G dieedile, ja A. lappa 300 mg/kg rühmale määrati AIN-93G dieet, millele oli lisatud A. lappa't (300 mg/kg). Ravi jätkati 24 päeva alates OA induktsiooni päevast annuses 15–17 g 190–210 g kehakaalu kohta päevas.
2.5. Kaalu kandevõime mõõtmine
Pärast OA esilekutsumist mõõdeti rottide tagajäsemete kandevõimet plaanipäraselt seadmega Incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA). Arvutati tagajäsemete kaalujaotus: kandevõime (%)
