Puhas Saposhnikovia divaricata õli küünalde ja seepide valmistamiseks hulgimüügi hajuti eeterlik õli, uus pillirooglampide hajutitele

lühike kirjeldus:

 

2.1. SDE ettevalmistamine

SD risoomid osteti kuivatatud ürdina firmalt Hanherb Co. (Guri, Korea). Taimse materjali taksonoomiliselt kinnitas dr Go-Ya Choi Korea Idameditsiini Instituudist (KIOM). Kinkeeksemplar (number 2014 SDE-6) deponeeriti Korea Standardsete Taimsete Ressursside Herbaariumisse. SD kuivatatud risoome (320 g) ekstraheeriti kaks korda 70% etanooliga (2-tunnise tagasijooksuga) ja seejärel kontsentreeriti ekstrakt alandatud rõhul. Keets filtriti, lüofiliseeriti ja säilitati temperatuuril 4 °C. Kuivatatud ekstrakti saagis toormaterjalidest oli 48,13% (massi järgi).

 

2.2. Kvantitatiivne kõrgefektiivne vedelikkromatograafia (HPLC) analüüs

Kromatograafiline analüüs viidi läbi HPLC-süsteemi (Waters Co., Milford, MA, USA) ja fotodioodreadetektoriga. SDE HPLC-analüüsi jaoks kasutati prim-O-glükosüültsimifugiini standard osteti Korea Traditsioonilise Meditsiini Tööstuse Edendamise Instituudist (Gyeongsan, Korea) jasek-O-glükosüülhamaudool ja 4′-O-β-D-glükosüül-5-O-metüülvisamminool eraldati meie laboris ja identifitseeriti spektraalanalüüside, peamiselt NMR ja MS abil.

SDE proovid (0,1 mg) lahustati 70% etanoolis (10 ml). Kromatograafiline eraldamine viidi läbi XSelect HSS T3 C18 kolonniga (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, USA). Liikuv faas koosnes atsetonitriilist (A) ja 0,1% äädikhappest vees (B) voolukiirusega 1,0 ml/min. Kasutati mitmeastmelist gradiendiprogrammi järgmiselt: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) ja 20–65% A (23–40 min). Detekteerimislainepikkust skaneeriti lainepikkusel 210–400 nm ja registreeriti lainepikkusel 254 nm. Süstimismaht oli 10,0μL. Kolme kromooni määramiseks valmistati standardlahused lõppkontsentratsiooniga 7,781 mg/ml (prim-O-glükosüültsimifugiin), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glükosüül-5-O-metüülvisamminool) ja 31,125 mg/ml (sek-O-glükosüülhamaudool) metanoolis ja hoiti temperatuuril 4 °C.

2.3. Põletikuvastase toime hindamineIn vitro

2.3.1. Rakukultuur ja proovide töötlemine

RAW 264.7 rakud saadi Ameerika Tüpkultuuride Kollektsioonist (ATCC, Manassas, VA, USA) ja kasvatati DMEM söötmes, mis sisaldas 1% antibiootikume ja 5,5% FBS-i. Rakke inkubeeriti niisutatud atmosfääris 5% CO2-ga temperatuuril 37 °C. Rakkude stimuleerimiseks asendati sööde värske DMEM söötmega ja lisati lipopolüsahhariidi (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, USA) temperatuuril 1 °C.μµg/ml lisati SDE juuresolekul või puudumisel (200 või 400μg/ml) veel 24 tundi.

2.3.2. Lämmastikoksiidi (NO), prostaglandiin E2 (PGE2) ja tuumorinekroosifaktori määramineα(TNF-α) ja interleukiin-6 (IL-6) tootmine

Rakke töödeldi SDE-ga ja stimuleeriti LPS-iga 24 tundi. NO tootmist analüüsiti nitriti mõõtmisega Griessi reagendi abil vastavalt varasemale uuringule [12Põletikuliste tsütokiinide PGE2, TNF-i sekretsioonαja IL-6 määrati ELISA komplekti (R&D systems) abil vastavalt tootja juhistele. SDE mõju NO ja tsütokiinide tootmisele määrati lainepikkustel 540 nm või 450 nm, kasutades Wallac EnVision™mikroplaadilugeja (PerkinElmer).

2.4. Osteoartriidi vastase toime hindamineIn vivo

2.4.1. Loomad

Isased Sprague-Dawley rotid (7 nädala vanused) osteti firmalt Samtako Inc. (Osan, Korea) ja neid hoiti kontrollitud tingimustes 12-tunnise valguse/pimeduse tsükliga°C ja% õhuniiskust. Rottidele anti laboritoitu ja vett.piiramatultKõik katsemenetlused viidi läbi vastavalt Riiklike Tervishoiuinstituutide (NIH) suunistele ja need kiitis heaks Daejeoni ülikooli (Daejeon, Korea Vabariik) loomade hooldamise ja kasutamise komitee.

2.4.2. OA esilekutsumine MIA-ga rottidel

Loomad randomiseeriti ja määrati ravirühmadesse enne uuringu algust (rühma kohta). MIA lahus (3 mg/50μKetamiini ja ksülasiini seguga esilekutsutud anesteesia all süstiti parema põlve intraartikulaarsesse ruumi otse 0,9% soolalahust. Rotid jagati juhuslikult nelja rühma: (1) soolalahuse rühm ilma MIA süstita, (2) MIA rühm MIA süstiga, (3) SDE-ga ravitud rühm (200 mg/kg) MIA süstiga ja (4) indometatsiiniga (IM) ravitud rühm (2 mg/kg) MIA süstiga. Rottidele manustati suu kaudu SDE-d ja IM-i 1 nädal enne MIA süstimist 4 nädala jooksul. Selles uuringus kasutatud SDE ja IM annused põhinesid varasemates uuringutes kasutatud annustel [10,13,14].

2.4.3. Tagumise käpa raskusjaotuse mõõtmised

Pärast OA esilekutsumist oli tagakäppade raskuskandevõime algne tasakaal häiritud. Kaalukandetaluvuse muutuste hindamiseks kasutati teovõimetuse testerit (Linton Instrumentation, Norfolk, Ühendkuningriik). Rotid paigutati ettevaatlikult mõõtekambrisse. Tagajäseme poolt avaldatav raskuskandejõud keskmistati 3 sekundi jooksul. Kaalu jaotussuhe arvutati järgmise võrrandi abil: [kaal paremal tagajäsemedel / (kaal paremal tagajäsemedel + kaal vasakul tagajäsemedel)] × 100 [15].

2.4.4. Seerumi tsütokiinide taseme mõõtmine

Vereproove tsentrifuugiti 10 minutit kiirusel 1500 g temperatuuril 4 °C; seejärel koguti seerum ja säilitati temperatuuril −70 °C kuni kasutamiseni. IL-1 tasemedβ, IL-6, TNF-αja PGE2 sisaldust seerumis mõõdeti R&D Systemsi (Minneapolis, MN, USA) ELISA komplektide abil vastavalt tootja juhistele.

2.4.5. Reaalajas kvantitatiivne RT-PCR analüüs

Põlveliigese koest ekstraheeriti totaalne RNA, kasutades TRI reagendi® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), pöördtranskribeeriti cDNA-ks ja PCR-amplifitseeriti, kasutades TM One Step RT PCR komplekti SYBR rohelisega (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Reaalajas kvantitatiivne PCR viidi läbi, kasutades Applied Biosystems 7500 reaalaja PCR süsteemi (Applied Biosystems, Grand Island, NY, USA). Praimerite järjestused ja sondi järjestus on toodud tabelis.1Proovi cDNA alikvoote ja võrdset kogust GAPDH cDNA-d amplifitseeriti TaqMan® Universal PCR põhiseguga, mis sisaldas DNA polümeraasi vastavalt tootja juhistele (Applied Biosystems, Foster, CA, USA). PCR tingimused olid 2 minutit temperatuuril 50 °C, 10 minutit temperatuuril 94 °C, 15 sekundit temperatuuril 95 °C ja 1 minut temperatuuril 60 °C 40 tsükli jooksul. Sihtgeeni kontsentratsioon määrati võrdleva Ct (künnistsüklite arv amplifikatsioonigraafiku ja läve ristumispunktis) meetodi abil vastavalt tootja juhistele.

FOB-hind:0,5–9 999 USA dollarit tükk

Minimaalne tellimuse kogus:100 tükki/tükke

Pakkumisvõime:10000 tükki/tükki kuus